Pročišćavanje i karakterizacija proteina
Nositelj |
|
ECTS bodovi: |
Studij: |
Opis predmeta
Predavanja: Izolacija i solubilizacija proteina iz prirodnih materijala. Taložne metode razdvajanja proteina. Kromatografske metode razdvajanja proteina: Gel filtracija. Ionska izmjena. Biospecifična kromatografija. Genetsko obilježavanje proteina za purifikaciju. Elektroforetske metode: Elektroforeza na poliakrilamidnom gelu. Imunoblot. Izoelektrično fokusiranje. Primjena analitičkih metoda za karakterizaciju proteina (NMR, MS, CD spektroskopija, rendgenska kristalografija). Osmišljavanje postupka purifikacije proteina.
Seminari: Pripreme za vježbe. Računalna simulacija postupka purifikacije proteina.
Vježbe: Pročišćavanje ovalbumina iz kokošjeg jajeta do visokog stupnja čistoće taloženjem amonijevim sulfatom, ionskom izmjenom i gel filtracijom. Ispitivanje čistoće elektroforezom nakon svakog koraka pročišćavanja. Pročišćavanje enzima kisela fosfataza iz kvasca taloženjem, gel filtracijom i ionskom izmjenom uz analizu porasta specifične aktivnosti nakon svakog koraka pročišćavanja.
Ishodi učenja:
Nakon uspješno savladanog gradiva ovog modula student će moći:
- samostalno osmisliti postupak pročišćavanja proteina iz odgovarajućeg prirodnog materijala ili uzgojene biomase;
- izabrati i provoditi najčešće korištene metoda za preparativno razdvajanje proteina uz razumjevanje prednosti i ograničenja svake metode i mogućnosti koje ona pruža;
- izabrati i provoditi najčešće korištene metode za analitičko razdvajanje proteina u svrhu praćenja ishoda pročišćavanja i koristiti odgovarajuće analitičke metode za karakterizaciju pročišćenih proteina;
- evaluirati učinkovitost postupka i modificirati ga u svrhu povećanja učinkovitosti, povećanja prinosa ili kvalitete proizvoda i smanjenja troškova.
Nastava
| Vrste nastave | sati | |
| oznaka | naziv | |
| P | Predavanja | 30 |
| A | Auditorne vježbe | |
| L | Laboratorijske vježbe | 20 |
| PK | Vježbe u praktikumu | |
| S | Seminar | 10 |
| T | Terenske vježbe | |
Uvjeti za dobivanje potpisa
| redovito pohađanje predavanja i položen kolokvij iz vježbi |
| Način polaganja ispita: | Pismeno | Usmeno | X |
Literatura
Obvezna literatura
| red. broj | Naziv |
| 1. | L. Streyer, Biokemija (prijevod), Školska knjiga, Zagreb, 1991. |
| 2. | Robert K. Scopes: Protein Purification. Principles and Practice.Springer-Verlag, Berlin, 1987. |
Preporučena literatura
| red. broj | Naziv |
| 1. | Guide to protein purification (Deutscher M.P. ured.) Methods in Ezymology 182, Academic Press Inc., San Diego, 1990. |
| 2. | P.Tijsen: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, Elsevier, Amsterdam, 1993. |
| 3. | D. Voet, J.G. Voet: Biochemistry. Wiley, New York, 1995. |